Yerinde hibridizasyon

Yerinde hibridizasyon kromozomal sapmaları tespit etmek için bir yöntemdir. Bazı kromozomlar, floresan boyalarla işaretlenir ve bir DNA probuna bağlanır. Bu teknik, gen mutasyonlarının doğum öncesi teşhisi için kullanılır.

Yerinde hibridizasyon nedir?

Yerinde hibridizasyon durumunda veya Floresan yerinde hibridizasyon RNA veya DNA'dan gelen nükleik asitler, moleküler genetik yöntemler kullanılarak belirli dokularda veya bir hücrede tespit edilir. Genellikle bu tip tanı, hamilelik sırasında yapısal veya sayısal bir kromozomal anormalliği tespit etmek için kullanılır.

Bu amaçla, kendisi nükleik asitten oluşan, yapay olarak üretilmiş bir prob kullanılır. Daha sonra organizmadaki nükleik asitlere baz eşleşmesi yoluyla bağlanır. Bu bağ, hibridizasyon terimi ile ifade edilmektedir. Kanıt, hastanın canlı yapısına dayanır ve bu nedenle yerinde kanıtlara karşılık gelir. Bu, tespitin test tüpünde gerçekleştiği in vitro yöntemlerden ayırt edilmelidir. Yöntem, 20. yüzyılda bilim adamları Joe Gall ve Mary Lou Pardue tarafından geliştirildi.

Teknoloji o zamandan beri gelişti. O sırada radyoaktif problar kullanılırken, örneğin, işaretleyici moleküllere kovalent bir bağa sahip floresan etiketli problar bugün kullanılmaktadır.

İşlev, etki ve hedefler

Yerinde hibridizasyon genellikle kromozomal anormallikleri, yani bir karyogramda tespit edilemeyen kromozomal anomalileri tespit etmek için kullanılır. Bu, yöntemin hamilelik sırasında kalıtsal hastalıkların belirlenmesi gerektiğinde her zaman kullanıldığı anlamına gelir.

Kromozom sapmaları günümüzde küçümsenmemesi gereken bir sorun olduğu için bu yöntemin kullanımı zamanla artmıştır. Hibridizasyon, annenin amniyotik sıvısından alınan doğal hücreler temelinde gerçekleşir. Teknolojinin temeli, renk işaretli probun DNA parçalarına bağlanmasıdır. Bağlama sayesinde, kopya sayısı daha sonra bir mikroskopla değerlendirilebilir, çünkü tek tek kopyalar bir ışık sinyali yayar ve böylece mikroskop altında görünür hale getirilebilir. Farklı prosedürler var. Ya analiz, bağlanmadan hemen sonra gerçekleşir.

Bu durumda, doğrudan DNA probuna bağlanan biyotin gibi bir floresan boya kullanılır. İn situ hibridizasyonun dolaylı yöntemiyle, değerlendirme hibridizasyondan hemen sonra gerçekleşemez, çünkü floresan maddeler yalnızca hibridizasyondan sonra proba bağlanabilir. Bu dolaylı yöntem doğrudan yöntemden daha sık kullanılır çünkü daha hassas olduğuna inanılmaktadır. Kromozoma özgü santrometre DNA problarına ek olarak, lokusa özgü DNA probları, kromozoma özgü DNA kütüphanesi probları ve karşılaştırmalı genom hibridizasyonları da vardır.

Kromozoma özgü santrometre DNA probları, kromozomal olarak sayısal anormallikleri tespit etmek için kullanılabilir. Bu, çoğaltılmış veya silinmiş kromozom şüphesi olduğunda esas olarak kullanıldıkları anlamına gelir. Konuma özgü DNA probları, özellikle karyogramda tespit edilemeyen minimum mutasyonların saptanması için uygundur. Eklemeleri ve translokasyonları saptamak için özellikle kromozoma özgü bir DNA kütüphanesi probu kullanılır.

Karşılaştırmalı genom hibridizasyonu ise kromozomal materyaldeki kayıp ve kazanımların kapsamlı bir analizidir. Günümüzde in-situ hibridizasyon, çeşitli kromozom mutasyonlarının teşhisinde çok önemlidir.Down sendromunun teşhisinde, örneğin problar kromozom 21'e bağlanır Bu amaçla, genellikle bu hastalıktan şüpheleniliyorsa kullanılabilen kromozoma özgü problar kullanılır.

Örneğin, ebeveynler daha önce hastalığı olan bir çocuğu doğurduysa ve ultrason görüntüsü anormalse, şüphe ortaya çıkabilir. İkili bağ yerine üçlü bir bağ varsa ve dolayısıyla üçlü renkli bir sinyal çıkarsa, teşhisin doğrulanmış olduğu kabul edilir.

Riskler, yan etkiler ve tehlikeler

Örneğin, PCR'nin tersine, yerinde hibridizasyon, kontaminasyona önemli ölçüde daha az duyarlıdır. Ek olarak, işlem için gereken süre çok daha azdır. Bununla birlikte, özellikle embriyolar kromozom kalıpları oluşturduğundan, kromozomal dağılımın geri kalanını ve dolayısıyla diğer hücrelerin genetik durumunu kesin olarak belirlemek için bir model kullanılamaz.

Renkli sinyaller başka nedenlerle örtüşebilir veya görünmez kalabilir. Sonuç olarak, bir teşhis aracı olarak in-situ hibridizasyon, hamilelik sırasında hatalara nispeten daha yatkındır. Yanlış tanılar ortaya çıkabilir ve ebeveynler sağlıklı bir embriyonun aleyhine karar verebilir. Yerinde hibridizasyon hatalarına duyarlılığı azaltmak için en az iki embriyonik hücre aynı anda incelenmelidir. İki hücreyi paralel olarak inceleyerek, artık sadece ihmal edilebilir bir yanlış teşhis riski var.

Böyle bir durumda, ebeveynler kesinlikle teşhise güvenebilirler. Yerinde hibridizasyon her hamile kadına değil, sadece risk grubundaki kadınlara sunulmaktadır. Bununla birlikte, hamile kadınlar kendi istekleri ile bu tür teşhislerden mahrum bırakılmamaktadır. Anormal ultrason bulguları veya anormal bir serum, bir doktorun teşhis prosedürünü önermesine neden olabilir. Kromozom sapmalarının büyük bir kısmı, ancak tamamı olmasa da, in-situ hibridizasyon kullanılarak teşhis edilebilir.

Bu nedenle, yerinde hibridizasyon asla tek başına gerçekleştirilmemeli, ancak her zaman geleneksel bir kromozom testi ile birlikte kullanılmalıdır. Hamile kadının bakımı bu prosedürde önemli bir rol oynar. Analizden önce, anne adayıyla, teknolojinin risklerini, olanaklarını ve sınırlarını açıklayan teşhis yöntemi hakkında derinlemesine bir tartışma yapılır.